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產鼠李糖脂生物表面活性劑防御假單胞菌的構建與優化

論文目錄
摘要第1-5頁
ABSTRACT第5-12頁
第1章 引言第12-27頁
  1.1 鼠李糖脂第12-22頁
    1.1.1 生物表面活性劑的概述第12頁
    1.1.2 鼠李糖脂的結構第12-13頁
    1.1.3 鼠李糖脂的生物合成第13-17頁
    1.1.4 鼠李糖脂的合成調控第17-19頁
    1.1.5 鼠李糖脂的高產策略第19-20頁
    1.1.6 鼠李糖脂的檢測與分析第20-22頁
  1.2 防御假單胞菌Pf-5第22-23頁
  1.3 Red/ET重組工程第23-25頁
    1.3.1 Red/ET重組工程概述第23-24頁
    1.3.2 Red/ET重組工程的工作原理第24頁
    1.3.3 可誘導啟動子第24-25頁
  1.4 立題依據與意義第25-27頁
第2章 實驗材料與方法第27-41頁
  2.1 實驗材料第27-31頁
    2.1.1 實驗菌株與質粒第27-28頁
    2.1.2 培養基和抗生素第28頁
    2.1.3 誘導劑第28頁
    2.1.4 寡核苷酸序列第28-30頁
    2.1.5 主要試劑第30頁
    2.1.6 主要儀器設備第30頁
    2.1.7 DNA序列分析軟件第30-31頁
  2.2 基礎分子生物學實驗方法第31-33頁
    2.2.1 PCR反應第31-32頁
    2.2.2 酶切體系第32頁
    2.2.3 電轉化方法第32-33頁
    2.2.4 質粒的提取以及酶切驗證第33頁
    2.2.5 測序鑒定第33頁
  2.3 構建Pf-5/Δpha菌株第33-34頁
  2.4 鼠李糖脂基因整合入防御假單胞菌Pf-5 基因組第34頁
  2.5 同源重組構建鼠李糖脂操縱子相關的表達載體第34-36頁
    2.5.1 構建重組載體pBBR1-genta-P_(apra)-RhlAB第34-35頁
    2.5.2 構建重組載體pBBR1-kan-P_(tac)-RhlAB第35頁
    2.5.3 構建重組載體pBBR1-kan-P_(rhaB)-RhlAB第35-36頁
  2.6 鼠李糖脂表達載體轉化入防御假單胞菌Pf-第36頁
  2.7 鼠李糖脂檢測第36-38頁
  2.8 生長曲線和產鼠李糖脂曲線的測定第38頁
  2.9 鼠李糖脂的產物分析第38-39頁
  2.10 實時熒光定量PCR定量分析rhlAB基因第39-41頁
    2.10.1 RNA提取與鑒定第39頁
    2.10.2 反轉錄第39-40頁
    2.10.3 qRT-PCR反應第40-41頁
第3章 結果與分析第41-57頁
  3.1 工程菌Pf-5/Δpha的鑒定第41-42頁
  3.2 工程菌Pf-5/Δpha-rhlAB的鑒定第42頁
  3.3 表達載體pBBR1-genta-P_(apra)-RhlAB的鑒定第42-43頁
  3.4 表達載體pBBR1-kan-P_(tac)-RhlAB的鑒定第43-44頁
  3.5 表達載體pBBR1-kan-P_(rhaB)-RhlAB的鑒定第44-45頁
  3.6 Pf-5 重組工程菌的鑒定第45頁
  3.7 Pf-5/Δpha-rhlAB鼠李糖脂產量檢測第45-46頁
  3.8 Pf-5 重組工程菌的生長曲線和產鼠李糖脂曲線第46-48頁
    3.8.1 生長曲線第46-47頁
    3.8.2 產鼠李糖脂曲線第47-48頁
  3.9 Pf-5 重組工程菌的鼠李糖脂產量檢測第48-52頁
  3.10 LC-MS/MS對產物中鼠李糖脂的結構分析第52-54頁
  3.11 鼠李糖脂rhlAB基因的定量檢測第54-57頁
    3.11.1 RNA的鑒定第54頁
    3.11.2 熒光定量PCR第54-57頁
第4章 討論第57-61頁
  4.1 鼠李糖脂基因異源表達宿主的探索第57頁
  4.2 鼠李糖脂基因表達載體的構建第57-59頁
  4.3 鼠李糖脂工程菌的培養基優化第59-61頁
第5章 結論與展望第61-62頁
  5.1 結論第61頁
  5.2 展望第61-62頁
參考文獻第62-70頁
縮略詞表第70-72頁
論文發表情況第72-74頁
受資助的基金項目第74-76頁
致謝第76-77頁

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