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基于毛狀根培養體系的甘草CHS及CHI基因功能研究

論文目錄
摘要第1-10頁
ABSTRACT第10-13頁
符號說明第13-14頁
前言第14-21頁
1 立題依據第14-18頁
  1.1 甘草藥材用途廣泛、需求巨大第14頁
  1.2 毛狀根在藥用植物次生代謝研究方面具有重要價值第14-15頁
  1.3 甘草苷是甘草的指標成分之一,具有重要的研究價值第15頁
  1.4 功能基因是藥用植物指標成分生物合成的重要分子基礎第15頁
  1.5 CHS及CHI基因是黃酮類化合物生物合成途徑的重要功能基因第15-18頁
2 研究思路與方法第18-21頁
  2.1 研究目標第18頁
  2.2 研究內容第18-20頁
  2.3 技術路線第20-21頁
文獻綜述第21-27頁
1 毛狀根的研究現狀第21-22頁
  1.1 藥用植物毛狀根的研究現狀第21-22頁
  1.2 甘草毛狀根的研究現狀第22頁
2 甘草中黃酮類化合物的研究概況第22-23頁
  2.1 黃酮類化合物研究概況第22-23頁
  2.2 甘草中黃酮類化合物研究概況第23頁
3 黃酮類化合物生物合成途徑功能基因的研究概況第23-27頁
  3.1 CHS基因的研究進展第24-25頁
  3.2 CHI基因的研究進展第25-26頁
  3.3 甘草中有效成分含量變化分子機制研究現狀第26-27頁
第一章 黃酮高含量甘草特異CHS、CHI基因單倍型篩選第27-31頁
1 實驗材料第27-28頁
  1.1 植物材料第27-28頁
2 實驗方法第28-29頁
  2.1 甘草特異CHS基因單倍型分析及篩選第28頁
  2.2 甘草特異CHI基因單倍型分析及篩選第28-29頁
3 實驗結果第29-30頁
  3.1 黃酮高含量組特異CHS基因單倍型篩選結果第29頁
  3.2 黃酮高含量組特異CHI基因單倍型篩選結果第29-30頁
4 小結與討論第30-31頁
第二章 過表達甘草CHI、CHS基因植物雙元表達載體的構建第31-48頁
1 實驗材料第31-32頁
  1.1 菌體及質粒第31頁
  1.2 試劑第31-32頁
  1.3 儀器及耗材第32頁
2 實驗方法第32-42頁
  2.1 含甘草CHI、CHS大腸桿菌工程菌的活化及重組質粒提取第32-33頁
  2.2 植物雙元表達載體pCAMBIA1305.1酶切位點的分析第33-34頁
  2.3 連接引物設計第34-36頁
  2.4 帶酶切位點的基因片段PCR反應第36-37頁
  2.5 PCR產物回收純化第37-38頁
  2.6 表達載體的構建第38頁
  2.7 目的基因片段與表達載體雙酶切產物的連接第38-41頁
  2.8 重組質粒的轉化第41頁
  2.9 陽性克隆的篩選及測序第41-42頁
3 實驗結果第42-47頁
  3.1 含甘草CHI和CHS基因的重組T質粒提取結果第42-43頁
  3.2 CHI和CHS基因擴增結果第43頁
  3.3 pCAMBIA1305.1載體質粒提取結果第43-44頁
  3.4 pCAMBIA1305.1載體雙酶切結果第44頁
  3.5 菌液PCR驗證結果第44-45頁
  3.6 菌液測序結果第45-47頁
4 小結與討論第47-48頁
第三章 轉甘草CHI、CHS基因發根農桿菌工程菌的構建第48-57頁
1 實驗材料第48頁
  1.1 菌體及質粒第48頁
  1.2 試劑第48頁
  1.3 儀器及耗材第48頁
2 實驗方法第48-52頁
  2.1 含重組pCA-CHI、pCA-CHS質粒大腸桿菌的活化第48-49頁
  2.2 pCA-CHI、pCA-CHS質粒的提取第49頁
  2.3 發根農桿菌ACCC10060的活化第49頁
  2.4 發根農桿菌ACCC10060感受態細胞的制備第49-50頁
  2.5 重組質粒pCA-CHI、pCA-CHS轉化發根農桿菌第50頁
  2.6 陽性克隆的篩選及PCR驗證第50-51頁
  2.7 測序結果分析第51-52頁
3 實驗結果第52-56頁
  3.1 pCA-CHI、pCA-CHS質粒提取結果第52頁
  3.2 pCA-CHI、pCA-CHS質粒驗證結果第52-53頁
  3.3 rolC基因驗證結果第53-54頁
  3.4 測序結果第54-56頁
4 小結與討論第56-57頁
第四章 過表達CHI、CHS基因甘草毛狀根的誘導及培養第57-67頁
1 實驗材料第57頁
  1.1 菌體第57頁
  1.2 試劑第57頁
  1.3 儀器及耗材第57頁
2 實驗方法第57-60頁
  2.1 發根農桿菌工程菌的活化第57-58頁
  2.2 轉CHI、CHS基因發根農桿菌工程菌質粒提取第58頁
  2.3 甘草外植體材料制備第58頁
  2.4 侵染、共培養及除菌第58-59頁
  2.5 甘草毛狀根的PCR驗證及測序驗證第59-60頁
3 實驗結果第60-66頁
  3.1 甘草外植體培養情況第60-61頁
  3.2 侵染及共培養情況第61頁
  3.3 毛狀根誘導情況第61-62頁
  3.4 轉CHI、CHS基因甘草毛狀根驗證第62-66頁
4 小結與討論第66-67頁
第五章 UPLC法同時測定甘草毛狀根中4種黃酮類成分含量第67-83頁
1 實驗材料第67頁
  1.1 植物材料第67頁
  1.2 實驗儀器第67頁
  1.3 試劑第67頁
2 實驗方法第67-70頁
  2.1 甘草毛狀根樣品的培養第67-68頁
  2.2 混合對照品溶液的制備第68頁
  2.3 供試品制備第68頁
  2.4 色譜條件第68頁
  2.5 線性第68-69頁
  2.6 檢測限和定量限第69頁
  2.7 重復性實驗第69頁
  2.8 精密度實驗第69頁
  2.9 穩定性實驗第69頁
  2.10 回收率實驗第69頁
  2.11 耐用性實驗第69-70頁
  2.12 毛狀根樣品的含量測定第70頁
3 實驗結果第70-82頁
  3.1 毛狀根液體培養情況第70頁
  3.2 UPLC方法學考察第70-73頁
  3.3 甘草毛狀根樣品中4種黃酮類化合物的含量分析第73-79頁
  3.4 相關性分析第79-80頁
  3.5 差異性分析第80-82頁
4 小結與討論第82-83頁
第六章 轉基因甘草毛狀根中CHS及CHI拷貝數的測定第83-93頁
1 實驗材料第83-84頁
  1.1 植物材料第83頁
  1.2 實驗儀器第83頁
  1.3 試劑第83-84頁
2 實驗方法第84-87頁
  2.1 毛狀根總DNA的提取第84頁
  2.2 甘草CHI、CHS、Actin基因的獲得第84-86頁
  2.3 qRT-PCR標準曲線的建立第86-87頁
  2.4 樣品qRT-PCR擴增第87頁
3 實驗結果第87-92頁
  3.1 毛狀根樣品DNA提取第87頁
  3.2 質粒標準品PCR及測序驗證結果第87-88頁
  3.3 qRT-PCR標準曲線的建立第88-90頁
  3.4 熔解曲線分析第90-91頁
  3.5 轉CHI、CHS基因甘草毛狀根中各目標基因拷貝數測定結果第91-92頁
4 小結與討論第92-93頁
第七章 結語第93-96頁
1 總結第93-94頁
2 展望第94-96頁
參考文獻第96-103頁
致謝第103-104頁
在學期間主要研究成果第104頁

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